wb蛋白实验二抗的原理

日期：2023-06-14 13:36:46

WB（Western Blotting）免疫印迹法，常用于检测蛋白质的方法。通过将蛋白样品进行电泳分离，在聚丙烯酰胺凝胶上形成蛋白条带，再将这些条带转移到毛细管膜或硝酸纤维素膜上，然后使用特异性抗体检测目标蛋白质。其中，二抗作为特异性检测的关键之一，其原理如下：

1、二抗的来源
首先要了解的是，抗体分为多克隆抗体PAbs（polyclonal antibodies）和单克隆抗体MAbs（monoclonal antibodies）两种。与PAbs相比，MAbs具有更高的亲和力和特异性，并且价格更昂贵。因此，在实验中，一般会使用一种来自于另一种物种的抗体作为二抗来检测主抗体。例如，当主抗体是小鼠来源的MAb时，可以使用兔子或羊的PAbs作为二抗；反之亦然。

单克隆抗体

2、二抗的结构
二抗的结构与主抗体相同，都由免疫球蛋白Ig（immunoglobulin）分子组成。Ig分子包括两个相同的轻链和两个相同的重链，其中重链可分为α、β、γ、δ、ε和μ等亚型。在哺乳动物中，IgG是最常用的二抗，因为它具有高度的特异性、亲和力和稳定性。

3、二抗的作用机制
二抗与主抗体结合的方式与主抗体与目标蛋白质结合的方式相似，都是通过双特异性的Fab段（抗原结合片段）实现的。当主抗体与目标蛋白质结合后，由于其Fc段（晶体片段）可以诱导免疫系统产生反应，因此会生成许多抗体，其中就包括以主抗体为抗原的抗体（即次级抗体）。这些次级抗体在某种程度上具有与主抗体相同的特异性和亲和力，因此可以作为二抗来检测主抗体。

4、二抗的选择和使用
在选择二抗时，需要考虑其与主抗体来源不同、亚型不同并且结合特异性高的特点。同时也要注意避免主抗体与二抗来源动物的内源性蛋白发生交叉反应。在使用二抗时，需要将其稀释至适当的浓度，并进行阴性对照（即只加主抗体或只加二抗）和阳性对照（即加有目标蛋白的细胞提取物），以确保实验的准确性和稳定性。

二抗作为WB分析中的重要组成部分，可以在实验中大大提高检测的敏感性和特异性，进而为科研工作者提供更准确的实验结果。