昆虫细胞杆状病毒表达系统实验步骤
日期：2023-07-12 14:51:37
昆虫细胞杆状病毒表达系统是一种常用的蛋白表达系统，适用于生产大量重组蛋白。以下是昆虫细胞杆状病毒表达系统的基本步骤：
质粒构建：将目标基因的编码序列克隆到适当的表达质粒中，通常使用能够在杆状病毒中复制的多克隆位点（MCS）。
转染昆虫细胞：将构建好的表达质粒转染到昆虫细胞中，常用的昆虫细胞包括昆虫细胞系Sf9和Sf21。转染方法可以是钙磷共沉淀法、电穿孔法或者化学试剂转染法。
杆状病毒质粒转座：在转染后，杆状病毒质粒会通过宿主细胞的重组作用转座到杆状病毒基因组中，形成重组杆状病毒。
重组杆状病毒扩增：使用传染性的重组杆状病毒进行扩增，通过感染更多的昆虫细胞来增加重组病毒的产量。
蛋白表达：将扩增得到的重组杆状病毒注入新的昆虫细胞中，让其感染并表达目标蛋白。通常在感染后的24-72小时内进行蛋白表达。
收集和纯化蛋白：收集感染后培养基中的细胞上清液或裂解细胞，提取含有目标蛋白的细胞上清液或裂解液。接下来，使用适当的方法（如亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤等）对蛋白进行纯化。
昆虫细胞杆状病毒表达系统的步骤可能因具体实验需求和不同的表达质粒而有所不同。在进行实验时，应遵循相关的实验室操作规范，并采取适当的质量控制措施来确保蛋白的质量和纯度。
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