超滤管浓缩上清提取外泌体的方法

日期：2023-06-20 16:19:38

一、实验目的

本实验旨在通过超滤管浓缩上清提取外泌体，得到高质量的外泌体进行后续研究。

二、实验原理

超滤管浓缩是一种常用的样品浓缩方法，其利用滤膜在物理上限制溶质的通过，将大量的水相液体从富集的毛细管中移除，以达到浓缩的目的。在提取外泌体的实验中，超滤管浓缩可以去除上清中的大分子物质，并将外泌体浓缩于少量的上清中，提高提取效率。具体步骤如下：

三、实验材料和方法

1、实验材料
（1）DMEM/F12培养基

（2）FBS

  （3）Pen/Strep

  （4）上清

  （5）PBS缓冲液

  （6）0.22μm的过滤器

  （7）Amicon Ultra-15或30 mL Centrifugal Filter Unit

  （8）离心机

2、实验步骤
  （1）将上清加入超滤管，使用0.22μm的过滤器进行预先过滤，以除去大分子杂质。

  （2）将离心管加入Amicon Ultra-15/30 mL Centrifugal Filter Unit中，注意不要让超滤管中的上清溢出。

  （3）使用PBS缓冲液对上清进行洗涤，将PBS溶液加入Amicon Ultra-15/30 mL Centrifugal Filter Unit中，并离心盘离心，将液体流出并重复两次以上。

  （4）加入PBS缓冲液至Amicon Ultra-15/30 mL Centrifugal Filter Unit顶端的标记处，离心机以3000 rpm离心10分钟，重复此步骤直至上清浓缩至2-3 mL。

  （5）将上清转移到新的离心管中，使用低速离心去除细胞碎片和沉淀，然后将上清收集起来，即可得到浓缩的外泌体样品。

四、实验结果及分析

  本实验通过超滤管浓缩上清提取外泌体，浓缩效果明显，实验中的上清可得到较高浓度的外泌体。经过离心去除细胞碎片和沉淀等处理，最终得到的外泌体样品纯度高且质量稳定，可以用于进一步的研究工作。

五、实验注意事项

  （1）操作前要做好消毒措施，避免污染样品和实验工作区。

  （2）使用Amicon Ultra-15/30 mL Centrifugal Filter Unit时，注意不要让超滤管中的上清溢出。

  （3）浓缩过程中，PBS缓冲液应逐步加入，避免对细胞产生不必要的影响。

  （4）最终得到的外泌体样品需要储存在低温下，避免热和其他因素的影响。

  （5）在操作过程中，应仔细观察实验结果，及时处理异常情况。

六、实验总结

通过本次实验，我们掌握了一种将超滤管浓缩应用于提取外泌体的方法，该方法简单易行，浓缩效果显著。同时，在实验过程中，我们也遇到了一些问题，如上清溢出、操作不规范等，这些问题都提醒我们在实验时要更加仔细地操作，保障实验结果的准确性和可靠性。