超滤离心提取外泌体步骤

日期：2023-05-29 16:29:52

超滤离心法是一种常用的外泌体提取方法，通过使用不同的分子量切点滤膜，可以有效地分离和富集各种大小的外泌体，从而方便后续分析和应用。

以下是超滤离心提取外泌体的详细步骤：

1、采集培养基或血浆等含有外泌体的样品，并进行预处理。首先，利用一些基本的生物学技术和试剂，去除样品中的细胞碎片、蛋白酶和核酸等干扰物质。例如，可以进行低速离心去除细胞碎片，加入蛋白酶抑制剂和核酸酶等去除蛋白质和核酸污染等。

2、将预处理后的样品进行低速离心，以去除未破裂的细胞和碎片等。通常使用300 × g或500 × g等相对低速度离心10-20分钟，收集上清液。

3、再将上清液进行高速离心，目的是将外泌体等细胞外囊泡沉积下来。通常使用1500 × g或2000 × g等的相对高速度离心30-40分钟，收集沉淀。注意，不同技术和实验条件下，高速离心的时间和速度可能有所不同。

4、将外泌体沉淀洗涤，以去除残留的蛋白酶、核酸酶等污染物。一般使用缓冲盐水或PBS等洗涤液，轻柔地重新悬浮沉淀，加入洗涤液后再进行低速离心去除残余污染物。

5、将洗涤后的外泌体样品进行超滤分离，以去除更大的碎片和细胞等杂质，同时富集外泌体并控制其大小分布。对于超滤离心法，可以选择不同的分子量切点滤膜，如100 kDa，50 kDa等，以分离不同尺寸的外泌体。将样品置于筛选装置中，如Amicon Ultra-15聚丙烯酰胺离心管，以适当的速度离心。离心过程中，分子量小于切点的蛋白质和外泌体会通过滤膜进入下部收集室，分子量大于切点的物质则被截留在膜上。通常使用1-2 mL的样品进行超滤，离心速度和时间取决于使用的滤膜型号和诊断仪器等。

6、将超滤液进行洗涤和纯化，以提高外泌体的纯度和质量。可以采用不同的方法进行进一步的纯化操作，如封闭颗粒提取法、亲和层析法等，根据具体情况进行选择。

超滤离心是一种强大的外泌体提取方法，能够有效地富集外泌体并去除杂质。按照上述步骤操作，可以获得高纯度的外泌体样品，为后续的分子生物学和生物医学研究提供了有力的基础。