细胞外泌体提取步骤
日期:2023-10-17 14:54:46
提取细胞外泌体的步骤可以包括以下几个关键的操作:
细胞培养和收集:选择合适的细胞株进行培养。当细胞生长到一定程度后,收集培养上清液并离心去除细胞碎片和残留细胞。
预处理:对上清液进行预处理以去除细胞残余物和大颗粒物质。可以通过低速离心(如300×g)去除大细胞碎片,然后再用高速离心(如2,000×g或10,000×g)去除细胞碎片、凝集物和大颗粒。
超速离心:将预处理后的上清液进行超速离心,以沉淀细胞外泌体。通常使用高速离心(如100,000×g或更高速度)离心沉淀细胞外泌体。
液体去除:去除上述步骤离心得到的沉淀,将剩余液体小心地抽取或排空,以避免干扰后续的操作。
再悬浮与清洗:使用合适的缓冲液再悬浮细胞外泌体沉淀,然后再次进行离心。这个步骤可根据实验需要重复进行,目的是去除潜在的污染物和离心残留。
冷冻保存或进一步处理:根据实验需求,可以将提取得到的细胞外泌体冷冻保存或进一步进行分离、纯化、分析等后续处理。
细胞外泌体的提取步骤可能因研究目的、细胞类型、培养条件等因素而略有差异。
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