大鼠淋巴细胞趋化因子CXCL12转化实验elisa
日期：2023-08-24 16:18:10
进行大鼠淋巴细胞趋化因子CXCL12的转化实验ELISA需要以下步骤：
样本制备：收集大鼠淋巴组织或细胞培养上清液作为样本。使用适当的方法，如组织匀浆或离心，获得清晰的样本上清液。
免疫板涂覆：取96孔酶联免疫吸附板（ELISA plate），将目标物质（如CXCL12抗原）溶解在适当的缓冲液中，按照要求，将其加入各孔中，并在4°C下过夜孵育。
阻断：倒掉涂有CXCL12抗原的溶液，加入阻断缓冲液（例如5%牛血清蛋白/BSA）封闭孔中未被抗原覆盖的表面，以防止非特异性结合。
样本孵育：将待检测的样本（即淋巴组织提取物或细胞培养上清液），与试剂盒提供的稀释缓冲液或稀释液混合，根据实验需求适当稀释，并加入各孔，孵育一段时间以进行反应。
洗涤：使用洗涤缓冲液多次冲洗孔中未结合的物质，去除非特异性结合。
二抗孵育：加入与大鼠特异性IgG结合的辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗，例如抗大鼠IgG HRP，在适当的温度下孵育一段时间。这个二抗将会与孔中已结合的目标物上的抗体结合。
再次洗涤：使用洗涤缓冲液彻底清洗未结合的二抗。
底物添加：加入底物液（如TMB）并在适当的时间内孵育，生成可检测的信号。
反应终止：加入停止溶液停止底物反应，阻止信号进一步增加。
光密度测量：使用ELISA读板仪或多功能酶标仪，测量各孔中的光密度，这反映了CXCL12的转化水平。
数据分析：通过比较样本的光密度与标准曲线或对照样本的光密度，计算CXCL12的浓度或变化量。
在进行实验前，务必阅读和遵守相关的实验操作指南和安全规定，并按照试剂盒说明书中的特定步骤进行操作。
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