MBP蛋白标签纯化流程
日期：2023-08-10 15:36:33
MBP蛋白标签（Maltose-Binding Protein tag）是常用的蛋白纯化标签之一，可用于高效纯化目标蛋白。以下是一般的MBP蛋白标签纯化流程：
克隆构建：将目标蛋白的编码序列与MBP标签的编码序列连接在一起，构建目标蛋白-MBP融合蛋白的表达载体。
表达：将目标蛋白-MBP融合蛋白的表达载体转化至适当的宿主细胞中，如大肠杆菌（E. coli）表达系统。
培养和诱导：在含有适当抗生素的培养基中培养细胞，使其扩增到一定密度后，加入适量的诱导剂（如异丙基硫代半乳糖苷，IPTG），诱导蛋白的表达。
细胞收获：培养一定时间后，收取细胞，通常通过离心将细胞沉淀下来。
细胞破碎：使用适当的方法（如超声波处理或机械破碎）破碎细胞，释放内部蛋白质。
亲和纯化：将细胞裂解液与MBP结合基质（如丙糖醛酸琼脂糖树脂，amylose resin）进行孵育，使MBP蛋白通过特异性结合捕获目标蛋白-MBP融合蛋白。
洗脱：通过适当的洗脱缓冲液解离目标蛋白-MBP融合蛋白与结合基质的相互作用，将目标蛋白从纯化树脂上洗脱出来。
纯化检测：采用各种蛋白质分析方法（如SDS-PAGE）检测纯化后的目标蛋白样品，确认其纯度和活性。
MBP蛋白标签纯化流程可能因实验条件和目标蛋白的特性而有所差异。在具体操作中，优化步骤、缓冲液和条件的选择对于确保高效纯化蛋白的成功至关重要。
上一篇： PKM蛋白存在细胞哪里？
下一篇： ccr5蛋白受体的功能
