gst标签蛋白纯化原理
日期：2023-07-27 14:39:58
GST标签是一种常用的蛋白纯化标签，它利用谷胱甘肽转移酶（GST）与谷胱甘肽（glutathione）之间的高亲和力来纯化目标蛋白。以下是GST标签蛋白纯化的原理：
构建融合蛋白：在目标蛋白的N端或C端连接GST标签，构建GST-目标蛋白融合蛋白。
细胞表达：将GST-目标蛋白融合基因导入宿主细胞，使其表达GST-目标蛋白融合蛋白。
细胞裂解：对表达的细胞进行裂解，释放细胞内的蛋白质。
亲和层析：使用谷胱甘肽琼脂糖珠（如Glutathione Sepharose）或磁珠等含有谷胱甘肽结合物的柱子，将裂解的细胞提取物加载到柱子中。由于GST与谷胱甘肽的高亲和力，GST-目标蛋白融合蛋白会与柱子上的谷胱甘肽结合物结合。
洗脱：通过洗涤步骤去除非特异性结合的蛋白质和杂质，保留结合的GST-目标蛋白融合蛋白。
解离：通过加入过量的还原剂、酸或其他解离条件，将GST-目标蛋白融合蛋白与谷胱甘肽结合物解离。
蛋白收集：收集解离后的目标蛋白，即纯化得到的目标蛋白。
GST标签蛋白纯化原理的关键在于利用GST与谷胱甘肽之间的高亲和力。谷胱甘肽作为固相材料，能够选择性地捕获含有GST标签的融合蛋白，而非融合蛋白等其他细胞组分。通过洗脱和解离步骤，目标蛋白可以从柱子上被分离和纯化出来。这种方法简单、高效，特别适用于大规模蛋白纯化和高表达的目标蛋白。
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