gapdh作为WB内参大小需要多少浓度的分离胶？

日期：2023-06-12 14:13:21

GAPDH（Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）内源性蛋白质，在Western Blot（简称WB）实验中常被用作内参，以对待测蛋白的表达量进行校正。而WB实验中的分离胶浓度，通常由蛋白质的分子量和研究需要决定。

目前常用的SDS-PAGE体系，根据不同的要求一般有两种类型的分离胶：T分离胶和U分离胶。其中，T分离胶适用于分子量在10-250 kDa之间的蛋白质，而U分离胶适用于分子量在5-100 kDa之间的蛋白质。

针对您的问题，GAPDH的分子量约为36 kDa，因此在使用T分离胶的情况下，通常推荐将分离胶的浓度设定在10%-12、5%之间，以保证GAPDH能够充分地被分离并且呈现出较好的带状。而在使用U分离胶的情况下，通常建议将分离胶的浓度设定在12、5%以上，以确保GAPDH的带能够显著地与其它蛋白质的带进行区分。

以上的建议仅仅是一个参考值，实际的分离胶浓度还需要根据具体的实验目的和试验数据进行调整。此外，在WB实验中使用内参时，一定要注意它的表达水平和是否稳定，以避免误差的产生。