酵母双杂交系统研究蛋白质相互作用的方法

日期：2023-06-07 14:05:46

酵母双杂交系统是研究蛋白质相互作用的方法，它利用酵母细胞内的转录因子结构域来检测蛋白质—蛋白质相互作用。

酵母双杂交系统的基本原理是利用酵母双杂交鉴定（Y2H）法进行筛选。该方法利用酵母细胞中的两个分子，一个称为“鱼钩”，它需要连接到目标蛋白质的N末端，另一个称为“诱饵”，它需要连接到目标蛋白质的C末端。当鱼钩和诱饵连接时，它们会组成一个转录激活因子的功能性域，从而激活一些下游基因的转录。

蛋白互作

酵母双杂交系统研究蛋白互作步骤如下：

1、构建酵母表达载体：将诱饵基因和鱼钩基因克隆到不同的酵母表达载体中。

2、转化酵母细胞：将诱饵表达载体和鱼钩表达载体同时转化到同一株酵母细胞内。

3、筛选阳性菌落：在选择培养基上生长细胞，检测是否出现了青白色小菌落。

4、鉴定蛋白质相互作用：通过对筛选出的菌落进行进一步的测试和验证，确定哪些蛋白质相互作用。

酵母双杂系统