哺乳动物表达系统原理流程步骤
日期：2023-07-26 10:31:31
哺乳动物表达系统是一种用于在哺乳动物细胞中产生外源蛋白的方法，具有广泛的应用。以下是哺乳动物表达系统的原理：
基因克隆：首先，将目标基因的DNA序列克隆到适当的表达载体上。表达载体通常包括启动子、转录终止子和选择标记等功能元件。
细胞培养：将所构建的表达载体导入到哺乳动物细胞中，可以选择多种不同类型的哺乳动物细胞，如CHO细胞、HEK293细胞等。细胞培养通常在培养皿或发酵罐中进行，提供适当的培养基和条件。
转染和选择：使用合适的方法将表达载体导入目标细胞内，例如化学法、电穿孔法、病毒载体转染等。然后，通过添加适当的选择抗生素或其他筛选方法，选择那些成功表达了目标基因的细胞。
表达与分泌：在成功转染的细胞中，表达载体会被细胞内的转录和翻译系统识别并转录成mRNA，然后翻译成蛋白质。如果表达载体包含了信号肽序列，这些蛋白质可能会被定向到细胞外分泌。
蛋白纯化与分析：在目标蛋白质表达和分泌后，可以通过各种蛋白纯化技术（如亲和层析、凝胶过滤、离子交换层析等）对其进行纯化。然后可以使用各种方法对目标蛋白质进行检测、定量和结构分析。
哺乳动物细胞表达系统利用哺乳动物细胞的转录和翻译机制，使得外源基因能够在细胞内转录和翻译成蛋白质。通过选择合适的细胞系、合适的表达载体和适当的培养条件，可以实现高效、稳定地表达外源蛋白，并进一步对其进行纯化和分析。这为研究蛋白质功能、药物筛选和生物制药等领域提供了重要工具。
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