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组织外泌体提取方法有哪些?

日期:2023-06-08 13:40:14


    组织外泌体(Extracellular vesicles, EVs)通过分泌到细胞外部分泌物中传递信息。EVs在细胞间信号转导和物质传递等方面起到了重要作用。而提取高纯度、活性的EVs是进行研究的前提和基础。本文将介绍常见的组织外泌体提取方法,并对其优缺点进行比较。
 
一、超速离心法
 
    超速离心法(Ultracentrifugation, UC)是目前最常用的提取组织外泌体的方法之一,其基本原理是通过离心分离样品中不同密度的成分。UC的操作步骤包括:第一步低速离心去除细胞碎片和细胞核,第二步高速离心去除大小不同的颗粒(如微粒子),第三步超高速离心沉淀组织外泌体。UC具有高效、简单等优点,但存在离心时间长、分离效果不稳定等缺点。
 
二、密度梯度离心法
 
    与UC类似,密度梯度离心法(Density gradient centrifugation, DGC)是一种通过离心分离出不同密度的成分的方法。与UC不同的是,DGC是通过在管内构建含有不同浓度的离子溶液梯度,利用泳动作用将泡膜小囊泡分离出来。DGC具有纯度高、分选精度好等优点,但存在耗时长、操作复杂等缺点。
 
三、尺寸筛选法
 
    尺寸筛选法(Size-exclusion chromatography, SEC)是一种利用柱填料筛分样品的方法,在制备EVs时可选择膜孔大小与EVs颗粒大小相对应的填料进行分离。SEC的优点在于可以得到更为纯净的EVs,同时保留更多EVs的生物活性,但其缺点在于对前处理和柱填料的选择要求高,通量也相对较低。
 
四、超滤法
 
    超滤法(Ultrafiltration, UF)是利用中空纤维膜或多孔膜滤除EVs,细胞碎片和其他大分子杂质。相比于其它方法,UF操作简便、速度快,同时可以得到更为纯净的EVs,并且可以组合应用其他方法实现不同级别的分离和纯化。但其缺点在于需要过滤器的选择和膜孔大小的控制,同时不能分离不同密度的EVs。
 
    以上四种方法都是常用的提取组织外泌体的方法,每种方法都有其优缺点,在实际应用中需要选择合适的方法。另外,随着技术的发展和研究深入,不断有新的EVs提取和纯化技术被开发和改进,如抗体亲和法、电泳法等,这些技术将进一步扩展EVs的应用范围和研究内容。