op50大肠杆菌保存方法

日期：2023-06-02 11:39:14

OP50大肠杆菌是研究蛋白质、基因和代谢过程等生命科学领域的重要模式生物。正确的保存方法可以确保OP50大肠杆菌在长期储存期间能够保持细胞活力并保留其生物特性。以下是OP50大肠杆菌保存的具体方法和步骤：

一、常规保存方法

1、冷冻保存方法
将OP50大肠杆菌接种于LB（Luria-Bertani）培养基中，在室温下振荡培养12小时，然后在37℃下孵育12至16小时。随后取3~5毫升培养物加入2毫升保护液（10%甘油或15%甘露醇），混匀后分装到干燥、无菌的冻存管中，置于−80℃冰箱内保存。

2、冻干保存方法
将OP50大肠杆菌接种于LB培养基中，使用振荡培养器进行培养，生长至进入稳定生长期后，收集细胞，离心去除培养基，用蒸馏水洗涤几次，剩余部分离心干燥，以氟里昂为载体进行冻干。将冻干样品分装入保护采血管中，置于−80℃冰箱内保存。

二、细节流程

1、选择优质菌株进行保存
在进行保存前，应选择优质、生长正常、不受污染的OP50大肠杆菌菌株作为样品。

2、收集细胞和离心
使用LB培养基培养OP50大肠杆菌到稳定生长期后，使用离心机将细胞沉淀下来，去除培养基并用蒸馏水洗涤几次。

3、加入保护剂
将细胞沉淀与10%甘油或15%甘露醇等保护剂混合均匀。

4、分装至冻存管中
将混合样品分装至已经消毒的冻存管中。

5、冷冻保存
放置已经分装好样品的冻存管于−80℃冰箱中保存。

6、冻干保存（可选）
将混合样品分装至保护采血管中，以氟里昂为载体进行冻干处理，放置于−80℃冰箱内保存。

三、常见问题及解决方法

1、OP50大肠杆菌保存时间有多久？
经过正确保存，OP50大肠杆菌可以被长期保存，其保存时间一般为6个月至2年。但具体保存时间还需要考虑保存的温度、细胞活力以及使用前的复苏条件等因素。

2、如何判断已经保存的OP50大肠杆菌是否健康活跃？
可以通过下板培养的方式来判断已存放的OP50大肠杆菌是否能够生长。同时，可以观察存储的样品是否有细胞死亡或者出现了污染等情况。

3、冷冻保存和冻干保存哪种方式更好？
两种保存方式各有优缺点。相对来说，冷冻保存更为简便，但需要时常检查是否将样品意外破坏或发生溶解现象；冻干保存则相对耗费时间成本高一些，但是样品更加稳定、易于长期保存。一般而言，在实验室中，两种保存方式皆可采用，需要根据不同情况来选择合适的保存方法。

4、出现OP50大肠杆菌较多的污染情况如何处理？
一旦出现OP50大肠杆菌样品污染，应立即采取措施清洗、消毒设备和使用一次性材料来防止污染传播。同时，不能使用这批污染的样品，需要重新进行保存或获取新的样品。

OP50大肠杆菌是研究生命科学领域的重要模式生物之一，存放好这一菌株对于维持实验的准确性意义重大。采用适当的保存方式和流程，可以确保OP50大肠杆菌在长期储存期间能够保持其活力和特性。