elisa抗体阻断实验原理
日期：2023-09-08 15:51:00
ELISA酶联免疫吸附试验抗体阻断实验是一种常用的方法，用于检测和验证抗体对特定抗原的特异性结合能力。其原理如下：
实验准备：将目标抗原固定在固相（如微孔板）上，并进行非特异性结合位点的封闭，以避免后续步骤中非特异性背景信号的干扰。
样品处理：将待测抗体与目标抗原预先混合，并孵育一段时间，使其形成抗原-抗体复合物。
反应与洗涤：将混合物加入已经固定了目标抗原的微孔板中，使复合物与固相上的抗原结合。然后进行多次洗涤，去除非特异性的未结合物质。
抗体标记物添加：加入与待测抗体不竞争的标记物标记的第二抗体或探针抗体。该抗体会结合到待测抗体的Fc区域。
酶标记物的反应与洗涤：加入酶标记物底物，使酶产生染色反应。此时，标记物所在的位置与酶活性成正比。
反应停止与测量：通过加入染色反应停止剂，停止酶反应，并阻断染色产物生成。利用光谱法或比色法测量吸光度，即可定量分析待测抗体的阻断效果。
根据实验设计和需要，可以将该方法用于血清、细胞上清液、组织匀浆等样品中的待测抗体的特异性结合能力检测与验证。实验结果可用于评估抗体的亲和力、特异性以及其对其他类似抗原的交叉反应性。
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