单克隆抗体制备过程中杂交瘤细胞的筛选原理
日期：2023-08-08 15:22:35
在单克隆抗体制备过程中，杂交瘤细胞的筛选是非常重要的步骤，它用于选择并生产能够产生特定单克隆抗体的杂交瘤细胞。下面是杂交瘤细胞筛选的原理：
免疫反应：首先，动物（通常是小鼠）被免疫以激发其免疫系统产生特定抗原的抗体。这个抗原可以是纯化的蛋白质、多肽或其他分子。
脾细胞提取：免疫后，从动物的脾脏中获取脾细胞。脾脏是免疫反应产生大量抗体的主要器官。
癌细胞融合：脾细胞与一种称为骨髓瘤细胞（常用的是骨髓瘤细胞系SP2/0或NS0）的癌细胞进行融合。这种融合通过使用聚乙二醇（PEG）或电脉冲等方法实现。
杂交瘤细胞选择：融合后的细胞形成杂交瘤，称为杂交瘤细胞。这些细胞具有两个来源的细胞核，包括脾细胞的抗体产生机制和癌细胞的无限增殖能力。
杂交瘤细胞筛选：为了筛选出能够产生特定单克隆抗体的杂交瘤细胞，可以通过以下方法进行筛选：
HAT培养基选择：使用含有嘌呤类似物（如氨基乙酰吡胺，H）和嘧啶类似物（如氯乙酸乙酯，A）的培养基（称为HAT），这种培养基可以选择只有杂交瘤细胞才能在其中存活和增殖，因为它们是两种亲本细胞的杂交体，而亲本细胞对HAT培养基中的一种成分缺乏代谢能力。
免疫筛选：将培养的杂交瘤细胞分装到多孔板中，并添加包含目标抗原的固相（如蛋白质或多肽）。
酶联免疫吸附实验（ELISA）：通过检测杂交瘤细胞培养上清中特定抗体的存在，可以进行筛选。
通过以上筛选方法，能够选择出产生特定单克隆抗体的杂交瘤细胞，并进行大规模培养，最终获得目标单克隆抗体。这些单克隆抗体具有很高的特异性和亲和力，可应用于医学诊断、治疗和研究等领域。
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