小分子抗体制备过程步骤
日期：2023-07-21 17:12:51
小分子抗体，也称为单域抗体或重链抗体，是一种相对较小的抗体结构，通常由单个抗体变量区域（VH）组成。以下是制备小分子抗体的一般步骤：
免疫动物选择：选择适合的免疫动物，如小鼠、大鼠或兔子。确保免疫动物对目标小分子具有良好的免疫应答。
免疫原设计：合成或纯化目标小分子作为免疫原。可以将其与蛋白质载体偶联，以增强免疫原的免疫原性能。
免疫程序：将免疫原注射到免疫动物中，按照特定的免疫程序进行多次免疫。通常需要注射多个剂量和间隔时间的免疫原。
细胞融合：采集免疫动物脾脏等免疫细胞，并将其与髓瘤细胞（如骨髓瘤细胞SP2/0或NS0）进行细胞融合。此过程会产生杂交瘤细胞，具有抗体产生能力。
杂交瘤筛选：将杂交瘤细胞分装到96孔板等细胞培养板中，以进行单克隆杂交瘤细胞的筛选。通常使用特定的培养基和筛选方法来选择能够产生目标小分子抗体的杂交瘤细胞。
克隆扩增：从阳性的单克隆杂交瘤细胞中收集并扩增单克隆细胞，以确保其单一来源并提高抗体的产量。
抗体纯化：通过离心、渗透层析、亲和层析等技术纯化小分子抗体。此过程可去除其他污染物，提高抗体的纯度。
验证和应用：对制备的小分子抗体进行验证，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫组织化学、免疫印迹等方法，以确认其特异性和活性。此后，可以将小分子抗体应用于各种研究领域，如疾病诊断、治疗或实验室研究等。
制备小分子抗体的具体步骤可能因研究目的、实验条件和抗体类型而有所不同。上述步骤提供了一般制备小分子抗体的常见流程，但实际操作时需根据具体情况进行调整和优化。
上一篇： ApoE抗体的主要作用机理
下一篇： 单克隆抗体的制备过程及原理
