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单克隆抗体的纯化工艺流程步骤

日期：2023-06-27 15:36:33

    单克隆抗体的纯化工艺流程通常包括以下步骤：
 
一、细胞培养和收获：
    1. 将表达单克隆抗体的细胞（通常是哺乳动物细胞株）培养在适当的培养基中。
    2. 监测细胞密度和生长情况，确保达到最佳表达水平。
    3. 当细胞达到一定密度时，收获细胞，通常通过离心将细胞分离出来。
 
二、细胞破碎和固态物去除：
    1. 使用适当的破碎方法（如超声波、高压等）破碎收获的细胞，释放细胞内的单克隆抗体。
    2. 除去细胞碎片和固态物质，如细胞壁残留、脂质、核酸等，可通过离心和过滤等步骤实现。
 
三、亲和层析：
    1. 准备含特异性配体的亲和层析柱，配体可以是与单克隆抗体特异结合的蛋白、蛋白G/A等。
    2. 将破碎后的细胞上清液通过亲和柱，使单克隆抗体与配体结合。
    3. 通过洗脱步骤，使用适当的洗脱剂（如低pH、高盐、可竞争性配体等）将单克隆抗体从柱上洗脱。
 
四、离子交换层析：
    1. 将洗脱的样品加载到离子交换层析柱上，根据单克隆抗体的等电点和亲和性进行分离。
    2. 使用不同梯度的盐浓度或pH值，逐渐洗脱不同的蛋白质成分，将单克隆抗体分离纯化。
 
五、尺寸排阻层析：
    1. 将经过离子交换层析的样品加载到尺寸排阻层析柱上。
    2. 根据分子大小，通过柱上的多孔素材选择性地分离和洗脱目标单克隆抗体。
 
六、浓缩和 Buffer 调整：
    1. 使用适当的浓缩方法（如超滤、沉淀等）浓缩纯化后的单克隆抗体样品。
    2. 调整样品的缓冲液，以适应后续的储存、分析或制剂的要求。
 
七、纯化检测和分析：
    1. 对纯化后的单克隆抗体样品进行质量分析，如SDS-PAGE凝胶电泳、Western blot等。
    2. 测定单克隆抗体的浓度和纯度，可以使用光谱法（如280 nm吸光度法）和蛋白质定量方法（如Bradford法）进行。
 
    这些步骤可以根据需要进行优化和调整，具体的纯化工艺流程可能会因目标单克隆抗体的特性和实验室的实际情况而有所不同。