沙门氏菌单克隆抗体pcr检测方法
日期：2023-05-26 11:00:25
沙门氏菌是引起食物中毒的主要病原体之一。单克隆抗体是一种高特异性、高亲和力的抗体，适用于沙门氏菌的检测。本文将介绍沙门氏菌单克隆抗体PCR检测方法。
1、实验材料：
(1) 沙门氏菌菌株和培养基
(2) LB培养基（tryptone 10 g/L，yeast extract 5 g/L, NaCl 10 g/L）
(3) PCR反应试剂盒（包括Taq DNA polymerase, dNTPs，引物等）
(4) 单克隆抗体和探针（j9九游会登录入口首页生物公司提供）
(5) 蛋白质电泳装置、膜传输装置、ECL检测试剂（cusabio公司提供）
2、实验步骤：
(1) 培养沙门氏菌菌株
将沙门氏菌菌株接入LB培养基中，在37°C下静培养12h至对数生长期，然后采集细菌进行下一步操作。
(2) 制备单克隆抗体和探针
将选择出的沙门氏菌特异性的抗原作为免疫原，注入小鼠体内制备单克隆抗体。同时，根据已知的沙门氏菌基因序列设计探针。
(3) 单克隆抗体的电泳检测
将制备好的单克隆抗体通过蛋白质电泳装置进行电泳检测，检测结果显示单克隆抗体的特异性和亲和力。
(4) 单克隆抗体的Western blot检测
将制备好的单克隆抗体进行Western blot检测，确定其特异性和亲和力。
(5) 沙门氏菌的PCR检测
将沙门氏菌DNA作为模板，使用引物进行PCR扩增。PCR反应条件为：94°C预变性2min，95°C变性1min，55°C退火1min，72°C延伸80s，共35个循环。PCR扩增产物通过凝胶电泳检测，分离出目标片段。
(6) 探针的ECL检测
将PCR产物转移到膜上，再使用探针进行ECL化学发光检测，能够对PCR产物进行检测，并能够确定其沙门氏菌的特异性。
3、结果分析
经过上述步骤后，能够得到沙门氏菌单克隆抗体PCR检测的结果。如果PCR扩增产物在目标大小范围内，并且通过探针的ECL发光检测显示特异性，则证明样品中含有沙门氏菌DNA。
本文介绍了沙门氏菌单克隆抗体PCR检测方法，该方法具有高灵敏度和特异性，适用于沙门氏菌的检测。
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