快速制备单克隆抗体的方法
日期:2023-05-17 14:53:38
单克隆抗体mAb(Monoclonal Antibody)是针对特定抗原的单一克隆抗体,其制备需要经过多个步骤。随着技术的发展,单克隆抗体制备方法也越来越多样化和高效化。以下是几种可供选择的快速制备单克隆抗体的方法:
免疫细胞筛选法Immune Cell Screening
免疫细胞筛选法是利用抗原处理免疫细胞后,在高通量显微镜下观察细胞的反应和特征,筛选出目标细胞并进行单细胞分离,最终获得单克隆抗体。该方法操作简便、高通量、快速,且适用于大规模筛选。
单细胞扩增法Single Cell Amplification
单细胞扩增法需要将免疫细胞通过多次限制性稀释和培养,使每个细胞独立生长形成单个克隆细胞,然后从单个细胞中收获单克隆抗体。该方法需要较长时间,并且可能存在细胞生长性差异导致的偏差。但该方法能获得高质量的单克隆抗体且适用范围更广。
基因组DNA筛选法Genomic DNA Screening
基因组DNA筛选法是先通过PCR扩增出免疫细胞基因组中的重链和轻链基因,然后进行克隆限制性酶切和测序分析,最终筛选出合适的克隆。该方法易于操作、成本低且适用于多种物种。但获得的克隆数量较少且存在突变等不确定因素。
亲和层析法Affinity Chromatography
亲和层析法依靠目标抗原与抗体的亲和力,将悬浮液中的抗体通过某种化学或物理方式吸附到亲和树脂上,再经洗脱、纯化和检测等步骤,最终获得单克隆抗体。该方法适用于大规模生产且可以同时获得多种克隆抗体,但需要特定的亲和树脂和条件,并且可能会因亲和力不足而导致重要抗原无法被识别的问题。
以上四种方法都有各自的优势和局限性,具体应根据实验需要和条件选择合适的方法进行单克隆抗体的制备。
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