cleaved parp1单克隆抗体制备的步骤方法

日期：2023-05-10 14:46:42

PARP1在DNA修复和转录调节等生物学过程中发挥重要作用的蛋白质。在细胞凋亡中，PARP1 被激活的半胱氨酸蛋白酶 caspase3 和 caspase7 水解，导致 PARP1 的 N端被裂解，并释放出具有死亡启动功能的 24kDa 片段。因此，cleaved PARP1 (裂解的PARP1) 成为了诊断细胞凋亡的重要分子标志物。

parp1抗体

单克隆抗体是一种高度特异性、高亲和力的蛋白质，很适合用于检测 cleaved PARP1 的表达。下面将介绍一种制备 cleaved PARP1 单克隆抗体的方法。

1. 免疫原的制备
①收集培养好的人类细胞，如 HeLa 细胞。
②将细胞洗涤并暴露在低渗肝素盐水（PBS）中。
③使用液氮的冷冻-溶解技术以及机械压碎法来裂解细胞，得到裂解物的混合物。
④使用蛋白质电泳和透析技术从混合物中纯化出 cleaved PARP1，然后用净化后的蛋白质制备成免疫原。

2. 免疫动物
  ①给小鼠注射 cleaved PARP1 免疫原。按照以下方式进行注射：首先，将免疫原混合物与免疫佐剂混合，然后经皮下、肌肉或静脉注射到小鼠体内。
  ②在一段时间内反复注射免疫原，以便免疫系统能够产生免疫反应。杀死小鼠并收集其脾脏，以制备免疫球蛋白。

3. 单克隆抗体制备
  ①从脾脏细胞中分离出单个 B 细胞，该细胞会产生特定的抗体。
  ②将单个 B 细胞与癌细胞融合，得到杂交瘤细胞。
③将这些杂交瘤细胞在培养基中培养，并筛选出产生免疫球蛋白的杂交瘤细胞。
④对产生的免疫球蛋白进行鉴定，挑选特异性强、抗原亲和力高的杂交瘤细胞，以制备单克隆抗体。

单克隆抗体