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Recombinant DT3C (Diphtheria toxin & spg 3C domain) for Antibody Internalization Assay

In Stock
  • 货号：
    CSB-EP360556CQR1
  • 规格：
    ￥1272
  • 图片：
    • (Tris-Glycine gel) Discontinuous SDS-PAGE (reduced) with 5% enrichment gel and 15% separation gel.
    • The purity of DT3C was greater than 90% as determined by SEC-HPLC.
  • 其他：

产品详情

  • 纯度：
    Greater than 90% as determined by SDS-PAGE.
    Greater than 90% as determined by SEC-HPLC.
  • 基因名：
    DT3C
  • Uniprot No.：
  • 种属：
    Corynephage beta
  • 蛋白长度：
    Linked Heterodimer
  • 来源：
    E.coli
  • 分子量：
    69.4 kDa
  • 表达区域：
    33-417aa (P00588) & 291-497aa (P19909)
  • 氨基酸序列
    GADDVVDSSKSFVMENFSSYHGTKPGYVDSIQKGIQKPKSGTQGNYDDDWKGFYSTDNKYDAAGYSVDNENPLSGKAGGVVKVTYPGLTKVLALKVDNAETIKKELGLSLTEPLMEQVGTEEFIKRFGDGASRVVLSLPFAEGSSSVEYINNWEQAKALSVELEINFETRGKRGQDAMYEYMAQACAGNRVRRSVGSSLSCINLDWDVIRDKTKTKIESLKEHGPIKNKMSESPNKTVSEEKAKQYLEEFHQTALEHPELSELKTVTGTNPVFAGANYAAWAVNVAQVIDSETADNLEKTTAALSILPGIGSVMGIADGAVHHNTEEIVAQSIALSSLMVAQAIPLVGELVDIGFAAYNFVESIINLFQVVHNSYNRPAYSPGHKGGGGSGGGGSGGGGSIDEILAALPKTDTYKLILNGKTLKGETTTEAVDAATAEKVFKQYANDNGVDGEWTYDDATKTFTVTEKPEVIDASELTPAVTTYKLVINGKTLKGETTTEAVDAATAEKVFKQYANDNGVDGEWTYDDATKTFTVTEKPEVIDASELTPAVTTYKLVINGKTLKGETTTKAVDAETAEKAFKQYANDNGVDGVWTYDDATKTFTVTE
    Note: The complete sequence including tag sequence, target protein sequence and linker sequence could be provided upon request.
  • 蛋白标签：
    N-terminal 6xHis-tagged
  • 产品提供形式：
    Liquid or Lyophilized powder
    Note: We will preferentially ship the format that we have in stock, however, if you have any special requirement for the format, please remark your requirement when placing the order, we will prepare according to your demand.
  • 缓冲液：
    If the delivery form is liquid, the default storage buffer is Tris/PBS-based buffer, 5%-50% glycerol.If the delivery form is lyophilized powder, the buffer before lyophilization is Tris/PBS-based buffer, 6% Trehalose, pH 8.0.
  • 复溶：
    We recommend that this vial be briefly centrifuged prior to opening to bring the contents to the bottom. Please reconstitute protein in deionized sterile water to a concentration of 0.1-1.0 mg/mL.We recommend to add 5-50% of glycerol (final concentration) and aliquot for long-term storage at -20℃/-80℃. Our default final concentration of glycerol is 50%. Customers could use it as reference.
  • 储存条件：
    Store at -20°C/-80°C upon receipt, aliquoting is necessary for mutiple use. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
  • 保质期：
    The shelf life is related to many factors, storage state, buffer ingredients, storage temperature and the stability of the protein itself.
    Generally, the shelf life of liquid form is 6 months at -20°C/-80°C. The shelf life of lyophilized form is 12 months at -20°C/-80°C.
  • 货期：
    3-7 business days
  • 注意事项：
    Repeated freezing and thawing is not recommended. Store working aliquots at 4°C for up to one week.
  • 产品描述：
        重组DT3C蛋白是通过在大肠杆菌中表达编码Corynephage beta白喉毒素（DT）的催化和转位结构域（33-417aa）与链球菌蛋白G衍生的3C结构域（291-497aa）融合的DNA片段制备的。 6xHis标签序列置于DT3C编码序列的N-端。由此得到的重组DT3C蛋白由白喉毒素（DT）组成，缺少受体结合结构域，但包含链球菌蛋白G（3C）的C1、C2和C3结构域。
        设计重组DT3C蛋白的理念源于白喉毒素的细胞毒性特性，它可以抑制细胞中的蛋白质翻译机制，以及Fc结合结构域（3C），可以与不同物种的任何IgG抗体结合。在室温下孵育后，它与一种mAb结合形成mAb-DT3C共轭物，其在体外的功能类似于抗体药物共轭物（ADC），将白喉毒素的细胞毒性效应有针对性地传递到靶向细胞中。因此，mAb-DT3C共轭物可用作评估细胞对mAb内化效率的工具，通过监测其诱导细胞死亡的程度来评估内化效率。此外，重组DT3C蛋白还有助于体外评估癌细胞对mAb的内化效率，有助于筛选更有效的单克隆抗体。
  • Datasheet & COA：
    Please contact us to get it.

产品评价

平均分:
5.0分 - 4 个评价

实验应用：抗体内化实验

产品评价： 我购买了CSB-EP360556CQR1用于抗体内化检测，使用了CUSABIO推荐的实验流程，实验流程很详细，服务也很周到。我用DT3C在不同的细胞中检测，并显示出不同的效果。我发现不同类型的细胞对DT3C的敏感度不同，其中一些细胞在抗体内化测定中显示出更好的结果。抗体内化的效率与抗原密度、抗体亲和力以及抗体和抗原结合表位密切相关。针对同一靶标的不同抗体也会表现出不同的内化效率。因此，建议在早期阶段可以多测试几个细胞。

By 张老师

实验应用：抗体内化实验

产品评价： 用CUSABIO的DT3C产品进行抗体内化效率检测，与其他方法相比，其mAb-DT3C复合物制备简单，且其抗体内化效率高于Mab-ZAP，性价比较高。我们会再次购买。

By 何老师

实验应用：细胞实验

产品评价： 我购买了DTC3重组蛋白用于杂交瘤细胞筛选，参考了某文献中的实验流程，结果很理想。具体实验流程如下： 用DT3C对杂交瘤细胞进行筛选：取96孔板，向每个孔中加入4μg/mL的DT3C（25微升），然后加入得到的杂交瘤的培养上清液（25微升），混匀后在室温下孵育30分钟。将NOR-P1细胞以2 x 10^5细胞/mL的浓度（RPMI培养基，含10%低IgG FBS (+)）接种，然后在37℃的CO2培养箱中培养3天。培养后通过显微镜观察，确定粘附细胞数约为使用阴性对照抗体时粘附细胞数的25%或更少的孔为阳性。将选定的克隆进行一个或两个亚克隆步骤，以建立8个单克隆杂交瘤细胞系。

By 何老师

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问答及客户评论

■ 常见问题解答
Q:

请给我们关于处理这个产品重组DT3C蛋白（CSB-EP360556CQR1）的建议，推荐的生物安全级别（BSL）是多少？

A:
该蛋白不具有传染性或致病性，可以像常规蛋白一样正常运输。如果您只是将此蛋白用于普通实验或检测，BSL-1可以满足需求。如果您的实验需要无菌操作，则需要BSL-2级别。
Q:

我对你们的产品DT3C重组蛋白用于抗体内化检测很感兴趣，想知道这对于胶质母细胞瘤是否有效？

A:
我们目前尚未进行相关实验验证。如果您有兴趣，我们可以提供一个小样本供您测试。
Q:

如果在孵育DT3C和抗体时，存在无血清培养基，是否会影响它们的结合？

A:
您可以使用无血清培养基或PBS。因为血清中含有IgG，IgG将会与DT3C结合。
Q:

DT3C蛋白能够检测ADC药物抗体的内吞效率吗？

A:
DT3C蛋白主要用于与候选抗体结合，模拟ADC药物抗体，并检测候选抗体的内吞效率。然而，ADC药物抗体本身具有诱导细胞内吞的功能，因此ADC药物抗体的内吞效率不需要DT3C的辅助。
Q:

DT3C的有效浓度是多少？

A:
DT3C的有效浓度为1-4ug/ml，您可以参考以下步骤来确定最佳DT3C浓度和抗体浓度。
第一步：固定抗体浓度（过量），拉DT3C梯度，确定最佳的DT3C杀伤浓度；
第二步：固定最佳的DT3C浓度，拉抗体梯度，确定最佳的抗体内化浓度；
第三步：根据稀释比例，将最佳的DT3C浓度和最佳的抗体浓度一起进行测试。
Q:

DT3C和抗体的结合表位是什么？

A:
DT3C结合到抗体的Fc末端。
Q:

DT3C蛋白的特异性是什么（添加后对细胞的影响）？

A:
DT3C利用链球菌protein G的3C domain结合抗体的Fc，其结合特性与protein G结合抗体Fc相同。mAb-DT3C只有通过抗体和靶细胞之间的特异性结合内化到细胞中时才会产生杀伤作用，DT3C本身在细胞外对细胞没有毒性。
Q:

您是否检查了您的重组DT3C产品在抗体内化检测中的生物活性？如果是的话，能否分享生物活性的验证数据？

A:
相关的活性测试仍在进行中，因此我们目前无法提供测试结果供客户参考，但我们可以结合我们目前的工作（文献和产品COA）给予一些建议和参考资料。
DT3C使用链球菌蛋白G的3C区域来结合抗体的Fc。其结合特性与结合蛋白G的抗体Fc相同。它可以结合到多种物种的IgG（包括人类、小鼠、兔子、山羊等），还可以结合到多种亚型（IgG1/2/3/4等），但其特定的结合强度（亲和力）尚未测试。
理论上，一个抗体可以结合到两个DT3C（DAR=2），但可能存在不均匀性，也可能与具体的抗体相关。目前暂未测试具体数值，因此建议在早期阶段探索最佳的耦合比。
首先可以固定抗体浓度为10ug/ml（过量），然后探索DT3C的梯度（0-10ug/ml），确定最佳的DT3C杀伤浓度，然后固定最佳的DT3C浓度，并将mAb拉到梯度中测试抗体的内化效率。目前，我们已经收到一些客户的反馈，大部分测试结果较好，但也有一些不行，分析与细胞类型有关。如果有DT3C背景杀伤，可能是细胞具有非抗体内吞作用，因此建议在早期阶段多测试几个细胞。
以下图片为我们DT3C的测试结果。
Q:

同样作为ADC药物抗体内化检测的工具，与Mab-ZAP相比，DT3C的优势是什么？

A:
DT3C与Mab-ZAP相比，在抗体药物内化效率方面具有以下三个优势： 首先，mAb-DT3C共轭物的制备简单，仅需在室温下孵育30分钟即可形成，可在体外发挥患者接受的ADC药物的功能；
其次，DT3C可以与来自不同物种（如人类、小鼠、兔子、山羊）的任何IgG结合，形成mAb-DT3C共轭物，从而进一步扩展DT3C作为检测mAb抗体内化的工具的适用范围；
第三，只有当mAb-DT3C共轭物被靶细胞内化时，细胞的存活率才显著降低。
值得一提的是，在有了DT3C之前，Mab-ZAP是唯一一种用于检测细胞内mAb内化效率的工具。Mab-ZAP由小鼠抗体和核糖体失活蛋白萨普霉素组成。当mAb-Mab-ZAP共轭物被细胞内化时，由于萨普霉素的毒性，细胞会发生凋亡。因此，通过细胞的存活率可以检测mAb是否被细胞内化。然而，Mab-ZAP本身可能在一定程度上减少mAb的内化效率，因为Mab-ZAP是含有抗小鼠抗体的大分子。与Mab-ZAP相比，mAb-DT3C共轭物的分子量稳定且较小于mAb-Mab-ZAP。此外，相关实验数据显示，mAb-DT3C的内化效率高于mAb-Mab-ZAP。
Q:

我们已经订购了1 mg的重组DT3C蛋白（CSB-EP360556CQR1），对测试结果非常满意，我们希望批量订购至少5 mg，是否有更多折扣？您是否有相同批号的现货？如果没有，交货周期是多久？

A:
对于批量订购，我们可以提供额外的折扣。这是我们的热销产品之一，目前没有相同批号的现货，但是在新批次的生产过程中，我们将严格遵循标准操作规程，并进行严格的质量控制，以确保批间差异尽可能小。目前我们有很多新批次的库存，收到您的订单后，我们可以在3-5个工作日内发货。
Q:

刚刚收到你们关于介绍DT3C用于抗体内化检测的邮件，想咨询一下。我有一种类似于ADC的药物，但连接体前面的所有部分都是合成的，可以用DT3C来检测内化以及内化速率吗？

A:
DT3C主要用于测量抗体的内化效率，对于ADC类似物的内化速率不适用。 CUSABIO的重组DT3C（白喉毒素和蛋白G 3C区域），包含没有受体结合域的白喉毒素（DT）和链球菌蛋白G的C1、C2、C3（3C）区域。DT3C是一种有效的工具，用于检测单克隆抗体（mAb）在Mab-ZAP处理后细胞内的内化效率。有研究显示，与mAb-Mab-ZAP相比，mAb-DT3C模拟了具有易于制备、分子量稳定性和高抗体内化效率等特点的抗体药物联结物（ADC）。据不完全统计，DT3C已被用于近130个ADC药物mAb筛选专利中，作为一种检测细胞抗体内化能力的工具。
Q:

DT3C是否只有BMK的杀伤效应？

A:
在正常情况下，BMK-DT3C在发生细胞内吞时会产生细胞毒性作用，而其他mAb-DT3C如果能内吞进入细胞内，也会产生细胞毒性作用。因为当它们被内化到细胞中时，DT3C被细胞质弗林蛋白酶切割，DT3C的催化结构域释放到细胞质中，DT3C的催化结构域导致延伸因子（EF）-2的ADP核糖基化，随后通过抑制蛋白质翻译机制导致细胞毒性。